segunda-feira, 27 de julho de 2015

'Microscópio Molecular' Encontra Vírus HIV Escondido no corpo

Cientistas desenvolveram uma nova sonda sofisticada que detecta esconderijos do HIV no interior e exterior das células. "É uma nova técnica fantástica que vai nos permitir visualizar o vírus em tecidos como nós nunca fomos capazes antes", diz o imunologista Richard Koup, vice-diretor do Centro de Pesquisa de Vacinas no Instituto Nacional de Alergia e Doenças Infecciosas ( NIAID), em Bethesda, Maryland, que não estava envolvido na pesquisa. Insights deste microscópio molecular de alta potência, revelados em uma conferência internacional da SIDA na semana passada, pode esclarecer questões críticas sobre a persistência do HIV e, em última instância, sobre como livrar o corpo do vírus.

Até à data, as avaliações de HIV no tecido conhecida como análise in situ foram prejudicadas por uma grande dificuldade. As sondas mais comuns, que utilizam marcadores fluorescentes ou marcadores radioativos para identificar a localização do vírus numa amostra de tecido, por vezes, têm dificuldade em distinguir o ARN alvo com o HIV e o DNA-circundante de componentes celulares. A nova técnica ter "muito pouco ruído", diz o imunologista Jake Estes Frederick do Laboratório Nacional do Instituto Nacional do Câncer (uma irmã do NIAID) em Frederick, Maryland, que o usou para produzir imagens altamente detalhadas do vírus da AIDS em vários tecidos de macaco que ele apresentou na conferência.

Estes desenvolveu a técnica em colaboração com Diagnostics Advanced Cell de Hayward, Califórnia, modificando o produto RNAscope já existente da empresa para detectar HIV RNA, DNA ou ambos ao mesmo tempo. ARN e ADN são feitos de nucleótidos que se emparelham com um complemento-guanina, por exemplo, que liga-se a citosina. Os métodos tradicionais para o mapeamento de uso do material genético do HIV, longas sequências de nucleótidos, estes oligómeros, chamados para localizar e ligar-se a cadeias complementares de ADN ou ARN em tecidos de amostra. Estes oligómeros são marcados com um "marcador" de modo que eles enviam um sinal quando atingem o seu alvo, permitindo que os investigadores criem uma imagem precisamente de onde o material genético do vírus está disperso por toda a amostra de tecido. Mas oligómeros são moléculas grandes e um pouco desajeitadas, e que, ocasionalmente, se ligam a diferentes sequências alvo de componentes celulares.

A nova técnica de Estes, pelo contrário, utiliza um sistema de sonda mais complexo, que praticamente elimina esses tipos de erros. Em essência, a abordagem corta um oligómero em dois e envia as duas metades para encontrar a sequência alvo. Seus marcadores acendem se um oligômero adicional que une as duas metades se liga a ambos, o que só ocorre quando eles param ao lado uns dos outros sobre o alvo. A probabilidade é extremamente baixa que as duas sondas pousariam ao lado uma da outra em outra coisa que senão HIV.

O HIV é um vírus de ARN, mas também se converte em uma forma de ADN que permite tecer seus genes num cromossoma humano. Estes, que trabalha com o virologista Jeffrey Lifson, também desenvolveu um DNAscope para visualizar este DNA HIV integrado em células humanas e que pode persistir por décadas sem ser atacado pelo sistema imune ou drogas anti-retrovirais (ARV)s. "Reservatórios" de células infectadas que possuem pró-vírus latentes são uma das principais razões porque combinações poderosas de ARVs não podem eliminar infecções e curar as pessoas.

Estes, Lifson, e colegas de trabalho pegaram macacos infectados com a versão símia do vírus da Aids e, em seguida, analisaram ​​tecidos de várias partes de seus corpos. Sua RNAscope e DNAscope foram capazes de distinguir as células que abrigam o pró-vírus, RNA viral, ou mesmo o vírus fora das células muito mais claramente do que qualquer técnica anterior in situ. "Estamos convencidos de que podemos ver virions individuais e que isso tem sensibilidade e especificidade requintada", diz Estes. Para checar seu trabalho, eles contaram virions do HIV a olho nu em uma de suas novas imagens, e em seguida, em comparando com a sua contagem de uma medida validada dos níveis virais. "Nós vemos uma correlação bonita", diz Estes.

Pesquisadores de HIV / AIDS que trabalham para curar a infecção tem vários obstáculos que estes novos escopos poderiam ajudar a superar. Um deles é a falta de vírus detectável no plasma sanguíneo de pacientes em terapia anti-retroviral eficaz, o que torna difícil para os pesquisadores avaliarem se uma intervenção destinada a curar a infecção está funcionando. Existem várias técnicas para medir as mudanças em reservatórios, mas cada uma tem deficiências que os novos escopos podem ser capaz de completar. Outro obstáculo é não saber exatamente onde no corpo o provirus prefere se esconder. Se as novas sondas puderem ajudar a resolver este enigma de longa data, eles poderiam refinar tentativas de encolher reservatórios virais. "Se nós podemos entrar e ver o que acontece com o vírus nestes diferentes tecidos com este tipo de sensibilidade e especificidade, ele vai responder um monte de perguntas", diz Koup do NIAID.



CB

Segue o link:
http://news.sciencemag.org/health/2015/07/molecular-microscope-finds-hidden-aids-virus-body&usg=ALkJrhiWyZX_fl7D8dhFCiQs72wCupDWDQ

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